苹果提取物中根皮苷与根皮素的分离鉴定及结构分析

根皮苷与根皮素是苹果中重要的二氢查尔酮类多酚物质，二者为糖苷与苷元的对应关系，根皮苷经水解可生成根皮素与葡萄糖，均具有抗氧化、降血糖、抗炎等生物活性，是苹果提取物的核心功能成分。因二者结构相似、极性相近，在苹果提取物中常共存，实现高效分离鉴定并完成精准结构分析，是苹果功能提取物开发与应用的关键环节。目前该过程主要依托色谱法实现分离，结合光谱技术完成结构鉴定与分析，整套技术体系兼具分离的高效性与结构解析的精准性，可实现二者的快速定性定量与结构表征。

苹果提取物中根皮苷与根皮素的分离核心依托高效液相色谱（HPLC） 为主的色谱分离技术，利用二者极性差异与色谱固定相的相互作用不同实现有效分离，前处理的纯化富集则为分离奠定基础，适配苹果提取物复杂基质的分离需求。苹果提取物粗提物中含果胶、多糖、有机酸、其他多酚等杂质，需先进行前处理纯化：采用水-乙醇混合溶剂浸提后，通过大孔吸附树脂（如AB-8、D101型）进行富集纯化，利用树脂对多酚类物质的选择性吸附，洗脱去除糖类、无机盐等杂质，得到富含根皮苷与根皮素的多酚组分，大幅降低基质干扰。分离阶段以反相高效液相色谱（RP-HPLC）为核心，固定相选用C18色谱柱，流动相采用甲醇-水（或乙腈-水）与甲酸的混合体系，通过调控流动相比例实现梯度洗脱。根皮苷因含葡萄糖苷基，极性显著高于根皮素，与非极性C18固定相结合作用较弱，保留时间更短，会先于根皮素被洗脱；根皮素为苷元，疏水性更强，与固定相结合更紧密，保留时间更长，二者在优化的色谱条件下可实现基线分离，分离度可达1.5以上。此外，制备型HPLC可实现二者的制备级分离，通过收集对应色谱峰的洗脱液，经旋蒸浓缩、冷冻干燥后得到高纯度的根皮苷与根皮素单体，满足后续结构分析与活性研究的需求。

根皮苷与根皮素的鉴定及结构分析，主要结合紫外-可见分光光度法（UV-Vis）、质谱法（MS）、核磁共振波谱法（NMR） 等光谱技术，从特征吸收、分子量、分子骨架及官能团等维度完成精准的结构表征，各技术互补验证，形成完整的结构分析体系。UV-Vis可实现初步定性，二者均为二氢查尔酮类化合物，分子中含苯环与共轭羰基结构，在紫外区具有特征吸收峰：根皮苷与根皮素均在280nm左右出现强吸收峰，为苯环的π→π*跃迁吸收，在310nm左右有弱吸收峰，为共轭羰基的n→π*跃迁吸收，可通过特征吸收峰初步判断二者的结构类型，且吸收峰强度与浓度呈线性关系，可同时实现定量分析。

质谱法可精准测定二者的分子量与分子碎片信息，采用电喷雾电离质谱（ESI-MS），在负离子检测模式下，根皮苷的准分子离子峰为m/z 433 [M-H]⁻，对应分子式C₂₁H₂₄O₁₀，二级质谱会出现m/z 271 [M-H-Glc]⁻的特征碎片峰，为失去一分子葡萄糖后的根皮素母核峰；根皮素的准分子离子峰为m/z 271 [M-H]⁻，对应分子式C₁₅H₁₄O₅，二级质谱会出现苯环裂解的特征碎片峰m/z 153、m/z 119，通过分子量与碎片离子信息可明确二者的糖苷与苷元对应关系，及分子的基本骨架。

NMR是结构分析的核心手段，通过¹H-NMR与¹³C-NMR可精准解析二者的分子骨架、官能团位置及连接方式。根皮素的¹H-NMR中，δ3.0~3.2 ppm处为二氢查尔酮母核中连接两个苯环的亚甲基（-CH₂-）特征峰，为单峰，δ6.0~6.5 ppm处为苯环上羟基邻位的氢原子特征峰，δ9.0~10.0 ppm处为酚羟基的活泼氢峰；其¹³C-NMR中，δ190 ppm左右为共轭羰基的羰基碳特征峰，δ110~160 ppm为苯环碳特征峰，δ45 ppm左右为亚甲基碳特征峰。根皮苷的¹H-NMR在根皮素特征峰基础上，新增δ3.2~4.0 ppm的葡萄糖苷基上的亚甲基氢峰与δ4.8 ppm左右的苷键处异头碳氢峰，¹³C-NMR则新增δ60~105 ppm的葡萄糖苷基碳特征峰，且苷键连接位置可通过异头碳的化学位移及相关谱（HMBC）进一步确认，明确葡萄糖苷基通过氧原子连接在根皮素母核的特定羟基位置。

此外，红外光谱（IR）可作为辅助验证手段，二者在3200~3600 cm⁻¹处均有宽强吸收峰，为酚羟基与羟基的O-H伸缩振动，1650 cm⁻¹左右为羰基C=O伸缩振动，1600~1500 cm⁻¹为苯环的骨架振动，根皮苷还在1100~1200 cm⁻¹处出现苷键C-O-C的特征伸缩振动峰，进一步验证官能团的存在。

苹果提取物中根皮苷与根皮素的分离以RP-HPLC为核心，经大孔树脂前处理纯化后可实现高效基线分离；结构分析则通过UV-Vis、ESI-MS、NMR等光谱技术的协同应用，从特征吸收、分子量、分子骨架、官能团及连接方式等维度完成精准表征，明确二者为糖苷与苷元的结构对应关系，及二氢查尔酮类的核心结构特征。这套分离鉴定与结构分析体系，为苹果提取物中根皮苷与根皮素的含量测定、功能提取物开发及质量控制提供了关键的技术支撑，也为其他多酚类糖苷与苷元的分离分析提供了参考。

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