显色溶液的制备:2,4-二硝基苯肼(2,4-dinitrophenylhydrazine)试液:称此试剂500mg置于50ml容量瓶中,加H2SO41ml,用甲醇稀释至刻度即得。

10%KOH溶液:称10gKOH置于100ml容量瓶中。加水30ml,用甲醇稀释至刻度即得。

测定法:取标准溶液、样品溶液、甲醇各1 ml分别置10ml容量瓶中,并分别加入2ml的2, 4二硝基苯肼试液,三个容量瓶在水浴中50～55℃下反应50min,用自来水快速冷却后,加KOH溶液至刻度,分别吸取上述三种反应后的溶液1 ml于10ml的具塞试管中,加甲醇10ml混匀,离心10min,上清液分别倾于50ml容量瓶中,离心沉淀再加甲醇10ml混匀,离心,上清液再分别倾于同一50ml容量瓶中,并重复一次,将三个50ml容量瓶均加甲醇至刻度。摇匀,于紫外分光光度计490nm处测定吸光度值。

上式的计算是基于取样操作严格按上述要求进行称量的。如果称量不能达到文中要求,则按如下公式计算:

A1:样品吸光值;A2:标准品吸光值;W1:样品取样量(g);W2:标准品取样量(g);V1:样品稀释体积;V2:标准品稀释体积

4.分光光度法测定水飞蓟素的含量(美国药典)

试液:将约1.0g的2、4-二硝基苯肼(2,4-dinitrophenylhydrazine),真空干燥8小时,称重,溶于2ml的硫酸中,临时配置该溶液。

标准溶液的制备:将称重的USP水飞蓟宾标准品溶于甲醇中,制成约2.0mg/ml浓度的溶液。